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    上圖!教你秒懂重組 DNA 技術(shù)常用工具酶!

    發(fā)布時(shí)間: 2021-08-25  點(diǎn)擊次數(shù): 8220次

    1 分子剪刀——限制性?xún)?nèi)切酶: 

    作用:識(shí)別特異序列,切割 DNA


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    限制酶的命名是根據(jù)細(xì)菌種類(lèi)而定,以 EcoRI 為例:


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    2 膠水——DNA 連接酶 

    作用:跟限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)著干,催化 DNA 中相鄰核苷酸間形成磷酸二酯鍵,使 DNA 切口縫合,連接 DNA 片段。 

    無(wú)論是雙股或是單股 DNA 的黏合,DNA黏合酶都可以借由形成磷酸雙脂鍵將 DNA 在 3'端的尾端與 5'端的前端連在一起。


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    3 DNA 聚合酶 

    就像玩拼圖能手,DNA 聚合酶用于 DNA 復(fù)制,連接兩條 DNA 單鏈形成一條 DNA 雙鏈,作用于堿基對(duì)間的氫鍵。 

    DNA 聚合酶主要應(yīng)用于: a.合成雙鏈 cDNA 中第二條鏈;b.缺口平移制做探針;c.DNA 序列分析;d.填補(bǔ) 3'末端。


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    4 反轉(zhuǎn)錄酶 

    作用:a.合成 cDNA;b.替代 DNA 聚合酶Ⅰ進(jìn)行填補(bǔ),標(biāo)記或 DNA 序列分析 

    反轉(zhuǎn)錄酶的基本特性:以 RNA 為模板聚合 cDNA 鏈以及雙向外切 DNA-RNA 雜合鏈中的 RNA 鏈。 

    主要用于熒光定量 PCR 和 cDNA 文庫(kù)構(gòu)建等。


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    5 多聚核苷酸激酶 

    作用:催化 DNA 5'羥基末端磷酸化,或標(biāo)記探針

    它是由 T 偶數(shù)噬菌體所感染的大腸桿菌分離出來(lái)的酶,能催化 ATP 的 γ-磷酸轉(zhuǎn)移到 DNA 或 RNA 的 5'-OH 末端生成 ADP 的反應(yīng)。 

    因?yàn)榇嗣傅拇呋磻?yīng)特異性很高,可用 32P 標(biāo)記的 ATP 特異地標(biāo)記多核苷酸的 5'末端。廣泛應(yīng)用于多核苷酸的鏈長(zhǎng)的測(cè)定和 5'末端核苷酸排列的確定等核酸結(jié)構(gòu)的研究。


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    6 堿性磷酸酶:切除 DNA5′末端磷酸基 

    堿性磷酸酯酶的作用是從 DNA 或 RNA 的三磷酸核苷酸上除去 5'磷酸根殘基??捎糜诜乐?DNA 片段自身連接,或標(biāo)記(5'端)前除 DNA 或 RNA 5' 磷酸。


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    7 末端轉(zhuǎn)移酶:在 3'羥基末端進(jìn)行同系多聚核苷酸加尾。 

    末端轉(zhuǎn)移酶的作用是將脫氧核糖核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵加到 DNA 分子的 3'-OH 末端。主要用于拼接人工接頭或在 3'端進(jìn)行引物標(biāo)記的時(shí)候。


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    8 DNA 水解酶 

    DNA 在水解酶的作用下,可以得到四種不同的核苷酸,即腺嘌呤脫氧核苷酸【A】,鳥(niǎo)嘌呤脫氧核苷酸【G】,胞嘧啶脫氧核苷酸【C】,胸腺嘧啶脫氧核苷酸【T】。


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    9 RNA 酶:切割 RNA 

    一類(lèi)催化 RNA 降解為小片段的核酸酶。 

    RNase 酶非常穩(wěn)定,是導(dǎo)致 RNA 降解最主要的物質(zhì)。


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